Pfu DNA Polymerase

         Pfu DNA Ploymerase是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为90kD。由于Pfu酶具有3’→5’核酸外切酶活性，它能纠正DNA扩增过程中产生的错配，而传统的Taq酶却不能，其它耐热DNA Polymerase如Vent、Deep Vent、Tli、UITma等虽具有校正功能，但Pfu酶是目前已发现的所有耐热DNA Polymerase中出错率最低的。Pfu酶无5’→3’核酸外切酶活性，PCR反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/min，比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶热稳定性更好，95℃ 1小时仍保持90%以上的活性，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。Pfu酶的PCR产物为平末端，可加A处理再与T-载体连接或使用平末端克隆载体。

活性定义：

         1单位(U) Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃，30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

质量控制：

         SDS-PAGE检测Pfu DNA Polymerase纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

酶贮存缓冲液：

         50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol；其他成份。

适用范围：

         用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析（SNP）和末端补平等。

注意事项：

1、PCR反应体系加样时，最后一步加入Pfu DNA Ploymerase，整个过程宜在冰上操作。

2、取Pfu DNA Ploymerase做PCR反应时，请用高压灭菌处理过的吸头。

3、10×Pfu Buffer中含20 mM Mg2+，如PCR反应需要较高Mg2+浓度，请另行加入。

4、 用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm值在55-80℃之间，引物浓度在0.1-0.5uM之间，比Taq酶略高。