Western blotting

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本试剂盒适合加一抗后的后续显色。操作简单，适合重组等高表达蛋白的检测，其敏感性不如ECL法。

本试剂盒根据一抗的不同又分为兔/小鼠/羊等
产品内容：

1. 封闭试剂 30g

2. 10倍浓缩抗体稀释液 50ml

3. HRP标记二抗， 0.5ml，效价1：500-3000

4. 20倍DAB浓缩显色液， 5mlA+5mlB

产品简介：

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。

注意事项：

1. 请根据一抗来源选择试剂盒。

2. western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。

3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。

4. 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程，如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。

5. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调PH到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

Storage：
-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和20倍DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。