T4 DNA Ligase

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T4 DNA Ligase		100u	RMB 883.3	现货

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说明：T4噬菌体DNA连接酶主要催化两条DNA链上相邻的5’磷酸基和3’-羟基之间形成磷酸二酯键。它的主要用途是连接带匹配粘端的DNA分子，或使平端的双链DNA分子互相连接或与合成接头相连接。也可催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接，但不能催化单链DNA之间的连接。

单位定义：0.01Weiss单位的T4 DNA连接酶可以在16℃下反应20分钟，连接95％的1μgλDNA-HindⅢ的分解物。

注意：一个Weiss单位的T4 DNA连接酶相当于核酸外切酶测定中的0.2单位或60个粘性末端(New England Biolabs)

存储缓冲液：10mM Tris-HCl(pH7.5 25℃),50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA和50％glycerol。

10×反应缓冲液：300mM Tris-HCl(pH7.8 25℃), 100mM MgCl2，100mM DTT，10mM ATP

质量控制：

1 活性：大于3Weiss单位/微升。

2 蓝白克隆鉴定：12Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg¾­内切酶酶切产生的5’或3’粘性末端DNA在4℃下，反应16小时后转化到大肠杆菌JM109培养，白色菌落小于总菌落数的2％；12 Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg¾­内切酶酶切产生的钝性末端DNA在4℃下，反应16小时后转化到大肠杆菌JM109培养，白色菌落小于总菌落数的5％。

3 核酸内切酶测定：20Weiss单位酶与1μg超螺旋质粒DNA在37℃下反应16小时，DNA的电泳图谱不发生变化。

4 单链和双链DNase测定：20Weiss单位酶与50ng同位素标记的单链或双链DNA反应16小时，单链DNA的释放量小于2％，双链DNA的释放量小于1％。

5 RNase测定：37℃时，20Weiss单位酶与50ng 3H-RNA保温5小时，释放量小于1％。

6 蛋白纯度：SDS PAGE 检测纯度≥90％。

Storage：
−20℃